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浓缩蛋白质的储存小技巧
发布时间:2021-11-23   点击次数:32次
  蛋白质是非常敏感的,即使已经提取浓缩,在储存时仍然会发生降解、聚合和失活。如下分析几种保存方法的优缺点和一些小技巧,在储存时应根据自己的蛋白和实验需求选择适合自己的方法,权衡利弊,以免造成实验的麻烦。下面跟随古朵生物一起了解下吧!
 
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      1.储存在4°C溶液
 
  将浓缩蛋白质储存在单一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中,放在4°C冰箱保存。
 
  优点:蛋白容易获得,可以快速进行实验,且同一管样品可重复取样,这样避免了因经常解冻而加速蛋白的降解。
 
  缺点:在重复取样时,温度升高且暴露于环境中,可能会导致微生物污染,蛋白质失活和氧化。要避免这种情况,可以把蛋白质分成小份储存,并加入蛋白酶抑制剂、抗菌剂和还原剂等。但也要根据自己蛋白的情况,如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子内存在二硫键,为保证其完整性,应该存储在氧化环境中。另外,储存时间超过一个月的蛋白可以考虑扔掉。
 
  2.储存在-20°C,加入冷冻保护剂
 
  可以将蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。
 
  优点:在低温下,蛋白质对微生物污染,蛋白酶降解和氧化反应更有抵抗力,容易保证其活性。用甘油或乙二醇稀释使蛋白处于溶液中,可以方便取样。此外,这种方式储存的蛋白质可以保存长达一年,对于抗体轭合物是一个好的选择。
 
  缺点: 蛋白质在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化,也需加入抑制剂、还原剂等。而且将样品存放在50%冷冻保护剂中有时是不可取的,取决于你接下来要做的实验。
 
  3.冻存在-80°C或液氮中
 
  将蛋白质分装成一次使用的量,快速冷冻。
 
  优点:可以长期保存(多年),不需要甘油、叠dan化钠等化学物质,避免蛋白质降解或微生物污染。
 
  缺点:冷冻蛋白质应一次性使用,为了避免反复冻融发生降解。此外,抗体轭合物(特别是碱性磷酸酶复合物)冷冻后可能会失活。
 
  4.冻干粉末
 
  将你的蛋白质脱水冻干成粉末,在冰箱中无限期存放。
 
  优点:蛋白质不会像在水溶液中发生会水解和其他形式的化学降解,冻干蛋白质的空间也比溶液要小,而且可以长期储存。
 
  缺点:冻干并不适用于所有蛋白质,与细胞膜相关的蛋白质容易被冻干破坏。而且,并非所有的蛋白质都冻干后都能保持稳定性,有的可能会变性,从而减少它们的有用性和再溶解的能力。此外,一些蛋白质可能需要与蔗糖、甘露醇或BSA等才能保持稳定。
 
  六个储存小技巧:
 
  1.无论是冷冻还是储存在溶液中,将蛋白进行分装,以避免冻融,降低污染的风险。
 
  2.低浓度蛋白能更好地与塑料或玻璃结合,将蛋白浓缩至1mg/ml以上,,或添加BSA等减少这种结合。
 
  3.添加乙二醇或甘油等保护剂,使蛋白稳定,防止结冰。。
 
  4.抑制微生物的生长,添加硫柳汞01%(w / v)或叠dan化钠0.05%(w / v)。
 
  5.添加EDTA 、PMSF等蛋白酶抑制剂来减少蛋白质降解。
 
  6.阻止半胱氨酸氧化,可以加入1-5mM还原剂,例如DTT。
 

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