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荧光抗体染料大集合!
发布时间:2021-04-25   点击次数:22次

染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色,然后进行观察。随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展,许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。荧光染料泛指吸取某一波长的光波后能发射出另一大于吸取光波长的光波的物质。利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛,并逐步显示出明显的优越性。下面简要先容应用于标记抗体的荧光染料及其种类:

1. 荧光素类染料,包括异硫氰酸荧光素(FITC)、 羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。这是一类具有较多苯环的化合物。应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图),在488nm处由氩离子激光激发,发射525nm的蓝绿色荧光。FITC能够与各种抗体蛋白结合,并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。

2. 罗丹明类染料,包括红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等。TRITC在550nm处被激发可发射出570 nm的黄色荧光。

3. Cy系列菁染料,菁染料通常有两个杂环体系组成,包括Cy2、 Cy3、 Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。

4. Alexa系列染料,它是由Molecular Probes开发的系列荧光染料。其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,应用广泛。 以高亮度、稳定性、仪器兼容性、多种颜色、pH值不敏感以及水溶性为主要特点。包括Alexa Fluor 350、405、430、488、532、546、555、568、 594、610、633、647、680、 700、750。目前市面上Alexa系列染料应用非常广泛,且逐渐替代传统的荧光染料,如Alexa Fluor 488可替代FITC、Cy2;Alexa Fluor 555可替代Cy3、TAMRA;Alexa Fluor 633可替代APC、Cy5等。

5. 蛋白类的染料,包括藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等。他们大多是在蓝藻中发现的蛋白。这类荧光染料可以与Cy系列菁染料偶联形成复合染料用于抗体标记。如市面上常用的有PE-Cy3/Cy5/Cy7、APC-Cy7、PerCP-Cy5.5等。

对于科研工编辑,该如何选择合适的荧光染料呢?理想的荧光染料一般具有以下几个特点:

1. 具有高的光子产量,信号强度高;

2. 对激发光有较强的吸取,降低背景信号;

3. 激发光谱与发射光谱之间距离较大,减少背景信号的干扰;

4. 易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性;

5. 稳定性好,不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。

用户可根据仪器以及实验需求来选择对应的荧光染料。

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